## 产品简介

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理而开发的检测试剂盒，具有以下特点：

1. **即开即用**：用户只需提供样品DNA模板，操作简便。

2. **高灵敏度**：经过优化的引物和其他组分确保检测灵敏度优秀。

3. **阳性对照**：提供阳性对照，帮助用户有效区分假阴性样品。

4. **高特异性**：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. **定性与定量检测**：该产品既可用于定性检测，也可用于定量检测，定量检测的线性范围至少为5个数量级。

6. **足量反应**：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. **仅限科研用途**：请注意，此产品仅限于科研使用。

## 使用方法

### 一、DNA提取（样本制备区）

采用自选方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

### 二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为避免样品或试剂盒其他成分的交叉污染，阳性对照浓度高，因此下列稀释操作应在独立区域进行：

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O（建议使用带芯枪头）。

3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。

4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。

5. 更换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。

6. 重复以上操作直至得到6个稀释度的标准曲线样品，置于冰上待用。若无需制作标准曲线，将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

### 三、试剂配制（试剂准备区）

根据待检样品的数量N，准备N+2个qPCR管，包括N个待检样品、1个阴性对照及6个阳性对照，向各PCR管中加入所需成分（详见说明书，可向我司索取）。

### 四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中添加2μL模板，加入顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

### 五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管置于PCR扩增仪器的样品槽内，按照以下扩增程序进行操作（详见说明书，可向我司索取）。

## 结果分析

1. 如果制作了标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。通过待测样品的Ct值可从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值。

2. 如果未制作标准曲线，依据以下标准判断结果：

阳性对照结果：Ct值<30，表现出明显的指数增长，且呈现典型的S型曲线。

阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，无明显的指数增长期和平台期。

样本检测结果：Ct值<35，显示出明显的指数增长，表明样本中检测出婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值则表明样本中未检测到婴儿利什曼虫，结果为阴性；如果Ct值在35-38范围内，应对样本进行复检，如复测结果仍在此范围且有明显增长，则判定为阳性，否则为阴性。

## 运输及保存

产品需低温运输，保存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。

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