宿主细胞DNA的来源

宿主细胞是生物制品的重要基础，许多生物制品如传统疫苗、重组蛋白、抗体药物、细胞治疗、基因治疗以及mRNA相关产品等，通常以中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、非洲绿猴肾细胞（Vero）、人胚肾细胞（HEK293）、大肠杆菌（E. coli）、酵母等作为表达载体进行生产。在后续的纯化过程中，宿主细胞DNA（Host Cell DNA, HCD）会通过阴离子交换层析被去除。虽然后续的纯化工艺可以去除HCD等杂质，但仍可能存在HCD的微量残留。这些外源DNA的残留可能引发潜在的免疫原性及安全问题，因此，HCD检测成为生物制品生产工艺中的一个关键质量检测指标。

HCD检测的重要性

宿主细胞残留DNA若进入人体，可能引发多种后果：

• 致癌性：残留的宿主细胞核酸可能携带致癌基因，导致部分细胞发生异常分化为肿瘤细胞，从而引起肿瘤形成。
• 感染性：宿主细胞DNA中可能含有传染性病毒基因，能通过复制和转录产生感染性病毒粒子。
• 增加免疫源性：宿主细胞基因组DNA富含CpG序列，可能通过Toll样受体（TLR）引发免疫反应。
• 潜在重组风险：宿主细胞基因组中的LTR序列有可能转移至细胞的原癌基因旁边，使这些基因在LTR的作用下被激活，导致正常细胞转化为癌细胞。

HCD的检测方法

依据《中国药典》2020年版的通则3407，对于外源性DNA残留量的测定，提供了三种方法：DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法。

DNA探针杂交法：这种方法先将样品中的外源性DNA加热变性为单链，然后吸附于固相膜上，与特异性标记的单链DNA发生杂交。通过与已知含量的阳性DNA对照比较，显色深度反映DNA的量，从而可测定样品中的外源性DNA残留量。

荧光染色法：该方法利用双链DNA荧光染料与双链DNA结合形成复合物，激发下在480nm波长产生荧光信号。使用酶标仪在520nm波长处进行检测，可计算供试品中的DNA残留量。

定量PCR法：针对宿主细胞DNA设计特异性引物和带荧光标记的探针。该方法具有高灵敏度，能够准确检测痕量的宿主细胞残留DNA，是生物制品中主流的检测标准方法。

宿主细胞残留DNA的检测产品特点

EVO视讯全新升级的宿主残留DNA检测产品，覆盖了CHO、E. coli、Vero、HEK293、毕赤酵母和支原体等多种细胞类型。试剂盒中的引物和探针序列来自药典，无需重复验证，确认方法即可使用。该产品基于定量PCR方法开发，灵敏度可达0.0003 pg/μL，且与其他DNA无交叉反应，从而减少假阳性结果的发生。

严格的生产管理体系使得批间差可控，CV小于10%。提供手动提取和自动化提取的完整解决方案，检测时间可在2小时内完成，并确保定量结果的准确性。

性能数据证明，EVO视讯标准品的测量偏差小于5%，且在具体的样本测试中显示出敏感性、特异性、重复性和准确性。提取试剂简单方便，预封装版试剂盒与全自动化仪器提取结合，灵活便捷，能够满足科研和临床工作中的多种需求。

EVO视讯致力于为生物制品检测提供高质量的解决方案，以助力医疗健康领域的发展。