EVO视讯 人B细胞淋巴瘤 OCILy19 培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤 OCILy19

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议 1:2 传代

传代情况：每 2 天更换培养基

备注：用无菌离心管收集培养基瓶，留作对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待细胞状态良好后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。

收到细胞后，使用 75% 酒精对细胞瓶全外表进行消毒，然后在超净工作台内操作，严格遵循无菌原则。将细胞瓶放入 37℃，5% CO2 的培养箱中静置 3-4 小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。可使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（最好包括 40x、100x 和 200x 各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，如果未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞未达到 80% 汇合度，将完全培养液收集至离心管中，留 5ml 完全培养基于 37℃、5% CO2 孵箱中培养。如果细胞密度超过 80%，然后进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去上清液，使用不含钙、镁离子的 PBS 轻洗细胞 1-2 次。
2. 添加 0.25% 胰蛋白酶消化液约 1-2ml 至培养瓶中，置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况。如果大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入超过 5ml 完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，在 1000 RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，添加 1-2ml 完全培养基重悬。
4. 按 1:2 比例进行分瓶传代（例如两个 T25 瓶），补充新鲜的完全培养基至每瓶 5-8ml，最后放入 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖 T25 培养瓶的 80% 面积时，弃去培养液并用 PBS 清洗细胞 1 次。
2. 添加 0.25% 胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置并在显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，转移悬液至 15ml 离心管中，在 1000 RPM 离心 5 分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入 1ml 的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入 -80℃ 冰箱中，如需转入液氮罐，请在 -80℃ 冰箱中存放超过 24 小时再转入液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），迅速置于 37℃ 水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用 75% 酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，在 1000 RPM 离心 5 分钟。
3. 弃去上清后，用 5ml 完全培养基重悬细胞，接种至 T25 培养瓶中，放于 37℃、5% CO2 的培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中，有些细胞可能因附着不牢而脱落，这是正常现象。如果脱落较多，请将所有培养液收集至离心管中，在 1000 RPM 离心 5 分钟，收集上清进行过渡培养（后期对比培养），沉淀后加入 1-2ml 胰酶，轻轻吹打重悬，消化 1-2 分钟后，再加入 5ml 完全培养基终止反应。重新离心，弃去上清，加入 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代（两个 T25 瓶），补充新鲜的完全培养基至每瓶 5-8ml，最后放入 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）关于细胞问题及重发的条款：

• 若在运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损或培养液严重泄漏等问题，将进行重发；
• 若细胞发生污染，请在收到产品的 48 小时内提交真实的实验结果，经核实后将进行重发；
• 常温发货的细胞在静置 24 小时后，干冰运输的细胞复苏后 24 小时内大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），将进行重发；
• 若干冰运输的细胞复苏后 24 小时内或常温发货的细胞静置 4 小时且未开封出现污染，均可重发；
• 对于细胞活性问题，请在收到产品的 7 天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后将进行重发；
• 收到细胞当天及第 2、3 天请拍照，若 3 天内未告知则视为产品合格。若在 4-7 天内出现问题需要提供收到细胞前 3 天的照片、以及出问题时的照片和相关操作详细步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任，若我方责任则重发；双方共同承担责任的需依据双方协商或者按照合同价的 50% 收费重发。

2） 关于细胞问题不予重发的情况：

• 客户造成的细胞污染，不予重发；
• 客户操作不当导致的细胞状态不良，不予重发；
• 使用非本库推荐的细胞培养体系，导致细胞状态不良，不予重发；
• 细胞状态不佳且未提供细胞培养前三天照片的，不予重发；
• 细胞在培养过程中经历其他处理，不予重发；
• 收到细胞 2 天内未及时告知的问题，不予重发；
• 其他情况视具体情况而定。

通过以上指南，您可以更好地管理人B细胞淋巴瘤 OCILy19 的培养与操作，确保实验的顺利进行。欢迎选择EVO视讯，我们将竭诚为您提供优质的产品与服务。